• 学术首页
  • 解决方案
  • 文章专题

搜索

商城

用户

  • 学术首页
  • 解决方案
  • 文章专题

返回

目录

用户

购物车

1.2.1 目的基因和载体双酶切

| 1.2.2 目的基因和载体连接

视频素材来源于JOVE  https://www.jove.com/cn/v/5070/restriction-enzyme-digests?language=Chinese
版权归原作者所有

目的基因扩增之后,就要将目的基因和表达载体连接在一起。通常使用酶切连接的方法,将目的基因和表达载体分别用同样的两个限制性内切酶进行双酶切,得到互补的酶切位点,然后用T4连接酶将这两部分连接在一起。
酶切操作建议参考购买的限制性内切酶的使用说明书,这里介绍常规方法。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 1

    配置反应体系

    在两个PCR管中分别混合以下成分:

    表达载体酶切
    表达载体 2ug
    10x缓冲液 5ul
    酶1 1ul
    酶2 1ul
    ddH2O 补齐至30ul



    PCR产物酶切
    目的片段 43ul
    10x缓冲液 5ul
    酶1 1ul
    酶2 1ul
  • 2

    PCR仪或者水浴进行酶切

    轻弹管壁混匀,短暂离心。
    放入PCR仪中,37℃3h。或者37℃水浴进行孵育。

  • 3

    跑电泳并进行胶回收

    跑电泳并进行胶回收

    以上商品加入询价单,并继续购买其他商品