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1.3.1 目的基因转化到感受态中

| 1.3.2 涂板培养

视频素材来源于JOVE  https://www.jove.com/cn/v/5059/bacterial-transformation-the-heat-shock-method?language=Chinese
版权归原作者所有

目的基因与载体的连接反应中,存在多种可能的连接方式,除了正确连接外,也可能出现载体和载体连接,目的基因和目的基因连接,或者部分连接的情况,因此需要把正确连接的重组质粒筛选出来。通常将连接产物转化到大肠杆菌中,通过菌落PCR或者酶切鉴定的方法筛选出阳性克隆株,然后送到测序公司进行测序。测序准确的阳性克隆株就可以进行大量扩增和保存。
常用的大肠杆菌感受态细胞为DH5α或者TOP10

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    融化感受态大肠杆菌

    取出感受态大肠杆菌,放于冰上使其慢慢融化。

  • 2

    加连接产物,孵育

    将连接产物加入100ul感受态大肠杆菌中,轻轻混匀,冰上孵育30分钟。

  • 3

    热激,冷激

    EP管放入42℃水浴箱中热激90秒,再迅速放于冰上2分钟。

  • 4

    加培养基

    EP管中加入400ul LB培养基,置于摇床上,37℃500rpm培养45分钟。

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