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酶切鉴定需要提质粒,如果直接送公司测序,此步也可省略。提取质粒一般也是使用试剂盒进行操作,这里参照爱必信的质粒小量快速提取试剂盒产品说明书进行介绍。
产品组份:
转化后的大肠杆菌进行培养,一段时间后,加入IPTG诱导蛋白表达。跑胶鉴定表达情况。
实验步骤
- 1
- 2
大肠杆菌培养
包含重组质粒的E.coli Strain BL21(DE3)菌株接种到5ml包含抗生素的LB培养基中,37℃,200rpm过夜培养。
加入IPTG诱导蛋白表达
过夜的培养基接种到500ml包含抗生素的LB培养基中,培养至OD600 =0.4–0.6。加IPTG诱导目的蛋白表达。可以对IPTG的浓度和时间进行摸索。IPTG的摸索浓度为0.05-1.0mM,诱导时间为1-5h。