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离子交换需要根据您蛋白的等电点选择阴离子交换柱或者阳离子交换柱。
1、如果您的蛋白的等电点小于缓冲液的PH，则选择阴离子交换柱（Q，DEAE）；
2、如果您的蛋白的等电点大于缓冲液的PH，则选择阳离子交换柱（S，SP，CM）；
这里以Q柱为例进行介绍。
实验步骤
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配置结合缓冲液
结合缓冲液的PH比目标蛋白的等电点高一个PH。
根据PH参照下表配置结合缓冲液：
△点击放大图片
洗脱缓冲液：结合缓冲液+1M NaCl
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样品处理
样品上样前需要过滤，置换到结合缓冲液中。缓冲液需要预先过滤和超声去除气泡。
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连接预装柱
系统设置一个低流速， 移除预装柱顶部的堵头，把柱子连接到纯化仪的接头上，注意要液滴对液滴进行连接，防止引入气泡。
去除柱子底部的堵头，连接到纯化仪上。
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预装柱平衡
用 3-5 个柱体积的蒸馏水洗去乙醇。
用 5 个柱体积的结合缓冲液平衡柱子，建议流速是 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。 -
样品上样
用上样环或者 superloop 加入预处理的样品（样品在上柱前一定要进行离心和过滤），
在上样时建议流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。 -
结合缓冲液清洗
用结合缓冲液洗涤至少 5个柱体积，直到吸收峰达到稳定基线或在流出物中没有物质流出。洗涤过程中建议保持流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml体积柱子）。
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洗脱缓冲液洗脱
用洗脱缓冲液采用一步洗脱或者线性梯度洗脱（拉NaCl梯度）。一步洗脱通常 5-10 个柱体积，线性洗脱通常 10-20 个柱体积。在洗脱过程中保持流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。
洗脱后，使用5个柱体积结合缓冲液+1M NaCl进行再生，然后用 5-10 个柱体积的结合缓冲液洗涤柱子，然后加入 20%乙醇。拧上柱子上下的堵头，防止柱子变干。 -
跑胶鉴定
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