逻辑设门方案
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生物学背景
自然杀伤细胞(Natural Killer cell, NK)是先天免疫中的一类十分重要的淋巴细胞,通过其细胞毒活性杀伤靶细胞;CD8T细胞表面表达CD8分子,可以特异的杀伤靶细胞,又称为细胞毒T细胞。CD8T细胞和NK细胞对靶细胞的杀伤机制有相同之处,例如颗粒酶途径。颗粒酶即颗粒相关丝氨酸酯酶,属于糜蛋白酶超家族,其中研究较多的是颗粒酶B。颗粒酶和穿孔素贮存于NK细胞和CD8T细胞的胞浆中,颗粒酶在Ca 2+存在条件下借助于穿孔素在靶细胞表面形成的跨膜通道进入靶细胞,激活caspase级联反应诱发靶细胞凋亡。
实验步骤
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逻辑设门图&数据结果说明
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使用6色的多色方案对小鼠CD8T细胞和NK细胞进行特性研究来自小鼠的血液和脾脏进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞,再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过FVS死活染料圈出活细胞,CD45+细胞门鉴定白细胞。通过CD3+圈出T细胞,CD8+鉴定CTL亚群,NK1.1+CD3-鉴定出NK细胞。最后通过GranzymeB指标表达研究CD8T细胞和NK细胞的杀伤能力。在3激光12色BD Celesta流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。