逻辑设门方案
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生物学背景
T、B淋巴细胞亚群和NK细胞在各种临床疾病，如自体免疫性疾病、免疫缺陷、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、再生障碍性贫血、病毒感染疾病、恶性肿瘤、免疫治疗等中均会发生异常改变。这些指标的检测对监测机体的免疫功能、控制上述疾病的发生和发展、了解疾病的机制、指导临床治疗具有极其重要的意义。CD19+ B细胞减少，体液免疫抑制；免疫缺陷时CD4+、CD8+ T减少；部分病毒时，CD8+ T增多；进展期AIDS、自身免疫性疾病或器官移植后可出现CD4+/CD8+比例异常；NK细胞参与抗肿瘤、寄生虫、病毒感染的免疫，并参与Ⅱ型变态反应和GVHD，IL-2治疗后NK细胞增加。
TBNK骨架Panel 多色方案是一种7色流式方案，设计目的是用于确定样本中CD3+细胞、CD4+和CD8+T细胞亚群、CD19+B细胞、CD56 BrightCD16-和CD56DimCD16+细胞亚群、CD14+CD16-经典单核、CD14+CD16+中间型和CD14 Low CD16+非经典型单核细胞亚群。
实验步骤
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配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Violet 405 nm CD3 BV510 UCHT1 5 µL 563109 CD56 BV711 NCAM16.2 5 uL 563169 CD14 BV786 M5E2 5 uL 563698 Blue
488 nmCD4 BV700 SK3 5 uL 566392 CD16 PE-Cy™7 B73.1 5 uL 335788 Red
640 nmCD19 APC-R700 HIB19 5 uL 564977 CD8 APC-H7 SK1 5 uL 641400 激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Violet 405 nm CD95 BV421 DX2 5 µL 562616 Blue
488 nmCD57 FITC NK-1 2.5 µL 555619 CD197 (CCR7) PE 2-L1-A 5 µL 566741 Red 640 nm CD45RA APC HI100 20 µL 550855 激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Violet 405 nm CD38 BV421 HIT2 5 µL 562444 Blue
488 nmIgD BB515 IA6-2 5 µL 565243 CD24 PE ML5 20 µL 555428 Red 640 nm CD27 APC M-T271 20 µL 558664 -
逻辑设门图&数据结果说明
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使用TBMNK backbone多色方案确定人体主要免疫亚群
健康人（N=5）的PBMC代表性分析。根据光散射特性识别淋巴细胞和单核细胞。通过淋巴细胞门，分别根据CD3+和CD19+细胞检测出总T和B细胞。可以通过总T细胞门进一步识别CD4+和CD8+ T 细胞亚群。通过CD3-CD19-门， 根据CD56brightCD16- 和CD56dimCD16+细胞检测出两个NK细胞亚群。通过单核细胞门，确定了CD14+CD16-经典型 (C)、CD4+CD8+中间型（I）和CD14low/CD16+非经典型（NC）单核细胞三个亚群。在3激光12 色BD FACSLyric 流式上获取样本。使用FlowJoTMv10 软件进行数据分析。开放FITC、PE、BV421和APC 通道，作为预留通道，并使backbone方案和预留通道之间的分辨率影响最小。