逻辑设门方案
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生物学背景
树突状细胞亚群多色方案是一种18色流式方案，设计用于对人树突状细胞（DC）进行全面的特性研究。该多色方案能够识别6种主要的DC亚群，包括cDC1、cDC2、CD123+Axl+DCs、CD11c+Axl+DCs、pDCs和CD16+DCs1,2。该多色方案允许进一步分析用于DC精细免疫分型的八个额外表面标志物。
实验步骤
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配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Ultraviolet 355 nm CD11c BUV395 B-ly6 5mL 563787 CD172a/b BUV496 SE5A5 2.5mL 749939 CD303 BUV563 V24-785 5mL 748415 CD86 BUV737 2331 (FUN-1) 5mL 612784 CD327 (Siglec-6) BV421 767329 2.5mL 747915 CD26 BV480 M-A261 1.25mL 746696 Violet 405 nm CD163 BV605 GHI/61 5mL 745091 AXL BV650 108724 5mL 747860 CD36 BV750 CLB-IVC7 0.6mL 747253 CD141 BV786 1A4 0.6mL 741006 Blue
488 nmHLA-DR BB515 G46-6 5mL 564516 CD3 BB700 SK7 5mL 566575 CD19 BB700 SJ25C1 5mL 566396 CD56 BB700 NCAM16.2 5mL 566573 Yellow
561 nmCD370 (Clec9A) PE 3A4/Clec9A 5mL 563488 CD14 PE-CFTM594 MP9 5mL 562335 CD123 PE-CyTM7 7G3 5mL 560826 Red 640 nm CX3CR1 Alexa Fluor®647 2A9-1 5mL 565895 CD1c APC-R700 F10/21A3 5mL 566614 CD16 APC-H7 3G8 5mL 560195 -
逻辑设门图&数据结果说明
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使用树突状细胞亚群多色方案对人树突状细胞进行深度免疫分型
从健康人（N = 3）分离的PBMC 的代表性分析。A）识别主要树突状细胞（DC）亚群。排除CD3+、CD56+和CD19 +谱系细胞后（未显示），识别出DC 并进行HLA-DR+Cd14-细胞设门。通过该门识别出CD141+ cDC1(蓝色)和CD16 +Dcs(绿色)。通过CD141-CD16-门，根据Axl+Siglec-6+细胞确定Axl+DCs。Axl+DCs 被进一步分为CD123+(紫色)和CD11c+(橙色)Axl+DCs。通过Axl-Siglec-6-门确定了CD123+CD11c−pDCs（浅绿色）和CD11c+CD1c+cDC2（红色）。B）该18色多色方案可进一步分析八个额外的DC 免疫分型标志物，并识别主要DC 亚群中不同的表达模式。在5激光28色BD FACSymphony A3 流式细胞仪上采集样本。使用FlowJo v10 软件分析数据。