逻辑设门方案
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生物学背景
CAR-T细胞免疫治疗又称为嵌合抗原受体T细胞免疫治疗，经CAR修饰的T细胞具备更强的增殖和抗凋亡能力，又不局限于肿瘤细胞MHC的识别，能更好杀伤肿瘤细胞。CAR-T回输前后分别抽提患者/正常人血液样本，对样本中的免疫T细胞亚群进行分析，如TN、TEM、TCM细胞等，各分化亚群的T细胞均可由特定的免疫指标进行鉴别并通过流式进行细胞比例的测定，以评估治疗效果。
实验步骤
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Panel Design&抗体用量&克隆号选择
激光 标志物 焚光染料 克隆 体积/测试 货号 Violet 405 nm Live/Dead FVS510 N/A 1uL 564406 CD8 BV650 RPA-T8 5uL 563821 CCR7 BV786 2-L1-A 5uL 566758 Blue 488 nm CD3 FITC HIT3a 20uL 555339 CD4 Percp-cy5.5 L200 20ul 552838 CD45RA PE-CY7 HI100 5uL 560675 Red 640 nm CD45 APC-CY7 30-F11 5uL 557659 CD28 APC CD28.2 20uL 559770 CD69 APC-R700 FN50 5uL 565154 -
逻辑设门图&数据结果说明
PBMC实验结果
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裂红实验结果
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T-sne流式数据分析展示：
通过对CD45+细胞进行T-sne降维分析，生成如下流式结果，利用热力图展示不同biomarker的表达情况以及其具体的内在联系，在可视化和信息集成化上更有优势，对于关键细胞靶点的表达情况一目了然：
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使用T细胞亚群多色方案对人T细胞进行特性研究
来自健康人的血液进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞，再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过FVS死活染料圈出活细胞，CD45+细胞门鉴定白细胞。通过CD3+圈出T细胞。CD4+和CD8+分别鉴定TH和CTL亚群，最后通过CCR7、CD45RA、CD28区分T细胞各分化亚群。在3激光12色BD Celesta流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。脑图使用Flowjo v10软件上的T-SNE插件创建。