逻辑设门方案
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生物学背景
调节性T细胞（Regulatory T cells）是维持机体免疫耐受的重要因素之一，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力，如防止自身免疫性疾病的发生。CD4+ CD25+/FOXP3+ 细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生，一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿关节炎、I型糖尿病等调节性T细胞的数量和功能均会发生变化。在许多恶性疾病如肺、胰腺和乳腺癌等已经发现调节性T细胞明显增高。调节性T细胞也阻断抗肿瘤免疫反应从而导致死亡率上升，也可用于骨髓移植术前术后的跟踪。
实验步骤
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Panel Design&抗体用量&克隆号选择
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Blue 488 nm CD3 FITC 145-2C11 2ul 553061 CD4 Percp-cy5.5 RM4-5 5ul 550954 Foxp3 PE FJK-16s 5ul 12-5773-80 CD45 APC-CY7 30-F11 5ul 557659 Red 640 nm CD25 APC PC61 5ul 557192 -
逻辑设门图&数据结果说明
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使用Treg细胞多色方案对小鼠T细胞进行特性研究
来自C57小鼠(N=3)的脾脏进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞，再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过CD45+SSC-A白细胞门，识别了CD3+T细胞。通过CD4+确定CD4+辅助T细胞。最后，通过CD25+/Foxp3+确定出Treg细胞亚群。在3激光12色BD Celesta流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。