逻辑设门方案
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生物学背景
MDSCs来源于骨髓祖细胞和未成熟髓细胞(immature myeloid cells,IMCs)。正常情况下,是树突状细胞、巨噬细胞和粒细胞的前体,能迅速地分化为成熟的粒细胞、DCs 和巨噬细胞,并进入相应的器官、组织,发挥正常免疫功能,IMCs占外周血单个核细胞的0.5%左右。在肿瘤、感染、炎症、败血症、外科损伤等其它病理条件下,受细胞因子的作用,这些髓系来源的前体细胞成熟受阻,因而停留在各个分化阶段,成为具有免疫抑制功能的MDSCs。它们并在细胞因子的作用下被募集、迁移、扩增,使得其在外周血中的数量和比例增加10倍左右,约占患者外周血单个核细胞的10%,贯穿疾病发生的整个过程。
实验步骤
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逻辑设门图&数据结果说明
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使用MDSCs多色方案对小鼠脾脏细胞进行特性研究
来自C57小鼠(N=3)的脾脏进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞,再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过CD45+SSC-A白细胞门,识别了CD11B+/GR-1+的MDSC细胞;另外,通过CD45+/CD11B+确定出髓系细胞亚群,从而利用LY-6C+/LY-6G+确定G-MDSC和M-MDSC细胞。再利用在3激光12色BD Celesta流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。