生物学背景
免疫细胞来源于造血干细胞，随着分化发育，分为髓系和淋系大类细胞群。本方案提供多色流式骨架，可用于比较淋系和髓系大类细胞群，初步筛选天然免疫髓系细胞中类似M1、M2单核细胞群，NK及NKT细胞群，及适应性免疫T细胞群，并了解其主要亚群CD4+T和CD8+T细胞的抗原应答阶段，及功能蛋白CD70的表达情况。正常情况下CD70主要在活化的淋巴细胞上表达，病理情况下，CD70高表达于多种肿瘤组织可导致免疫功能耗竭，诱导免疫逃逸。
panel&结果展示
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实验信息
样本类型
Human Blood
方案类型
Multicolor panel
实验方案
Surface marker staining
使用的仪器
4-laser,12-color(6 violet/4 YG/2 blue/2 red)BD FACSymphony A1 Flow Cytometer
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配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Blue 488 nm CD11B FITC ICRF44 5ul 562793 L/D 7-AAD / 5ul 559925 Red 637nm CD8 APC RPA-T8 20ul 555369 CD45 APC-CY7 2D1 5ul 557833 YG 561nm CD56 PE NCAM-1 20ul 555516 CD70 PE-CF594 Ki-24 5ul 562484 CD45RA PE-CY7 HI100 5ul 560675 Violet 405nm CD163 BV421 GHI/61 5ul 562643 CD4 V500 RPA-T4 5ul 560768 CD86 BV605 2331 (FUN-1) 5ul 562999 CD16 BV650 3G8 5ul 563692 CCR7 BV711 3D12 5ul 563712 CD3 BV786 UCHT1 5ul 565491 -
逻辑设门图&数据结果说明
图a.U-map
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图b.Heatmap
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图c.t-SNE
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图d.Flowsom
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使用多色方案对人外周血T、NK、髓系细胞进行分型分析
首先根据FSC-A & SSC-A去碎片，再根据FSC-A & FSC-H和SSC-A & SSC-H去粘连，通过7-AAD选出活细胞进行CD45 与 SSC-A组合识别淋巴、单核、粒细胞群。通过已有的免疫分型知识设门圈群分析定义T、NK、M1-like细胞群、M2-like细胞群。使用Flowjo v10软件进行算法降维UMAP、T-SNE及自动聚类FlowSOM分析，结合第三参数热图分析及overlay等功能，更全面分析定义样本所有细胞群的信息，及功能指标表达丰度的可视化。