7.1 Single-cell Suspensions from Mouse Lung

1.分离小鼠肺组织；

2.用PBS冲洗肺组织并用剪刀剪碎机械分散，增加酶解面积；

3.每个肺加入2.5ml消化缓冲液(100mg/ml Dispase II，10mg/ml胶原酶A，1500kU/ml DNase I和0.025M CaCl₂)；

4.在振荡器上于37℃温育1h；

5.使用移液管轻轻混合悬浮液，并进一步温育30min；

6.40μm过滤器过滤到50ml Falcon管中；

7.使用Beckman Coulter，Allegra X-12R离心机将悬浮液以900g离心5min，并吸出上清液；

8.将沉淀重悬浮于UV活/死染料中，并在室温下避光孵育30min；

9.将PBS加入悬浮液中，以900g离心5min，吸出上清液；

10.将细胞在含4％多聚甲醛的PBS中的中固定10min(10ml 16％PFA稀释于30ml PBS中)；

11.直接免疫染色或冷冻保存用于以后的抗体染色。