实验步骤
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制备流程
取已经免疫的小鼠，剪尾取血，并分离血清供作为阳性对照
1. 小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左腹侧朝上；
2. 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；
3. 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏；放入盛有5ml不完全培养液的培养皿中冲洗，剥去其周围的结缔组织。
4. 脾脏组织消化处理方法
A、研磨法：从5ml无菌注射器中取出活塞/柱塞。使用扁平的末端部分以温和画圆的方式研磨脾脏，碾磨至无明显红色结团为止，这样可以破坏脾脏和髓质，释放脾细胞。 将一个70μm细胞过滤器置于15或50mL无菌锥形管上，并用2ml推荐培养基润洗滤网。
注意：细胞可能会黏附于干燥的滤网上，润洗滤网可以减少这种情况
B、酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入400u/ml胶原酶(III型)5ml/只脾脏，37度消化20分钟，用70um筛网过滤，得到单细胞悬液。
注：(1)一般6-8周龄小鼠，根据品系不同，可得5-20×107细胞/只小鼠；(2)手术器械灭菌：术前高压灭菌外，也可将手术器械 泡在95%酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简便。
5. 从单细胞悬液中分离淋巴细胞：
a.另取无菌试管，先加入淋巴细胞分离液，然后将试管倾斜，略放平，吸取刚刚制备的细胞悬液缓慢的加入试管中，一般分离液和细胞悬液的体积比为1:2，1500转/分钟，离心20分钟。
b.离心后取出试管，取淋巴蹭，加入PBS离心洗两遍(PBS1000转/分钟，10分钟)。
c.洗好的细胞加入1640培养液和20%的血清中重悬。
