13.1 Single-cell suspensions from Human Skin

1.在皮肤活检后2小时内开始处理新鲜皮肤，存储在完全RPMI(10%FCS)培养基中
a.用无菌镊子将穿刺皮肤活检置于70μm细胞过滤器的预湿膜上，该过滤器位于6孔板的孔中，填充4ml RPMI(10%FCS)培养基。保持组织湿润。
b.在RPMI(10% FCS)中对滤器进行3次清洗，方法是将滤器与组织依次转移到充满4ml RPMI(10%FCS)培养基的新孔(6孔板)中。
c.将组织转移到RPMI(10%FCS)培养基(0.5ml)中，放入培养培养皿中。

 

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2.为移植体培养准备皮肤活检，在活检完成后2小时内进行皮肤处理

3.将皮肤组织转移到含有750μl RPMI(10% FCS)培养基液滴的培养皿中，用手术刀在液滴内切开(1个穿孔活检切成约10块约1mm × 1.2mm大小)。

4.将组织碎片转移到规定处理条件下的细胞培养孔中24h。

5.24h后，将组织碎片直接转移到消化混合物中，并在显微镜下检查孔中是否有残留的附着细胞。如果适用，收集培养上清液用于下游分析。

 

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