14.1 Single-cell Suspensions from Human tumor

1.在含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基中，将肿瘤和邻近的非癌组织切成小块(约1~2mm³)。

2.GentleMACS™通过肿瘤分离试剂盒消化，使用八通道带加热全自动组织处理器处理。

3.用100µm SmartStrainer过滤解离的细胞。

4.冰上的红细胞裂解缓冲液处理1~2分钟以裂解红细胞。

5.用1×PBS洗涤两次，每次以400×g离心5分钟后。

6.将细胞颗粒重悬于FACS中缓冲液(补充有2%FBS的PBS)，浓度约为10⁶个细胞/mL。

7.用抗人CD45的抗体和7-AAD染色。

8.用BD FACSAria™ III分选仪器通过流式细胞术对CD45+活细胞进行分选，便于之后测序。

 

GentleMACS全自动处理流程：https://m.bilibili.com/video/BV1YX4y127tv?vd_source=0ff41d41cad8b86a12b6cda29ad9a086