实验步骤
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抗体
试剂包括抗标签抗体、链霉亲和素和抗免疫球蛋白抗体用作实验开发。Eu或Tb作为供体,XL665或d2作为受体。常用的标签包括蛋白质和肽结构,如GST、6His、c-myc、FLAG®、HA、MBP,以及小的有机基序,如生物素和二硝基苯(DNP)。
Tips:基于Eu的检测需要在读出前添加氟化钾(KF)作为荧光助推器。
缓冲液
①可使用商业化适合的专用PPI buffer(建议)。
②实验室制备:使用1X PBS的基本缓冲液,pH为7.4,含0.1-0.5% BSA。可适当加入二硫苏糖醇(DTT)以增强信号。
仪器和耗材
使用配置有TR-FRET模块的酶标仪,在620和665nm处选择性和有效地定量荧光。多数微孔板均可适用于该技术,推荐使用适配20μl检测体系的微孔板进行检测,兼容96孔,384孔和1536孔。