实验步骤
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蛋白浓度
使用缓冲液制备5X初始浓度的蛋白X和Y。
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蛋白稀释
使用缓冲液制备10X浓度的竞争分析物。
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加样
选择384孔为例，空板中加入未标记蛋白2μl，依次加入5X蛋白X和蛋白Y，盖上封板膜，室温静置60分钟。
Tips参考2.2.3
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加检测试剂
每孔加入5μl抗标签供体和5μl抗标签供体。(或可将检测试剂预混在一起，以10μl/孔混合液加入样本中)。盖上封板膜，室温静置，孵育60分钟。
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读板
去掉封板膜，平行放入酶标仪，选择TR-FRET程序进行读值。
举例：Biotin-EGF和EGFR-FC与已知抑制剂相互竞争；未标记的EGF从21pM滴定到500nM，西妥昔单抗从3pM滴定到75nM。蛋白质和抗体浓度的增加导致蛋白质相互作用的减少导致信号减少。
图7：Biotin-EGF和EGFR-FC竞争实验
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