THUNDER TM TR-FRET 技术可以灵活建立蛋白互作模型,实现快速、高通量的化合物筛选。
实验步骤
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抗体
试剂包括抗标签抗体、链霉亲和素和抗免疫球蛋白抗体用作实验开发。Eu作为供体,FR作为受体。常用的标签包括GST、6His、FLAG、V5以及生物素等。
缓冲液
①抗体稀释缓冲液,即检测缓冲液,推荐使用商业化适合的专用检测缓冲液。
②蛋白即样本稀释缓冲液:推荐使用蛋白储存缓冲液或50mM HEPES pH7.4,100mM NaCl,0.1%Triton X-100 和 0.1%BSA。仪器和耗材
使用配置有TR-FRET模块的酶标仪,在615 nm和665 nm处选择性和有效地定量荧光。多数微孔板均可适用于该技术,推荐使用适配20μL检测体系的微孔板进行检测,兼容96孔,384孔和1536孔。