蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction)在生物过程中起着核心作用,当这些相互作用发生异常时,可能会导致疾病的发生,例如癌症和神经退行性疾病。因此,开发能够靶向 并调节这些相互作用的阻断剂,对于治疗相关疾病具有重要意义。使用TR-FRET技术可以灵活建立蛋白互作模型,并实现快速、高通量的化合物筛选。
实验步骤
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抗体
试剂包括抗标签抗体、链霉亲和素和抗免疫球蛋白抗体用作实验开发。Eu作为供体,FR作为受体。常用的标签包括GST、6His、FLAG、V5以及生物素等。
缓冲液
①可使用商业化适合的专用TR-FRET Detection Buffer (建议)。
②实验室制备:50 mM HEPES pH 7.4,100 mM NaCl,0.1% Triton X-100和0.1% BSA。仪器和耗材
使用配置有TR-FRET模块的酶标仪,在615和665 nm处选择性和有效地定量荧光。多数微孔板均可适用于该技术,推荐使用适配20μL检测体系的微孔板进行检测,兼容96孔,384孔和1536孔。