实验步骤
- 1
- 2
- 3
加样
以384孔板为例,取微孔板平置于操作台,以5μL/孔加入蛋白X(4X)后,加入蛋白Y(4X),盖上封板膜(防止样本蒸发),室温静置,孵育60分钟。
Tips 1:孵育时间可依据蛋白特性进行优化调整,延长或缩短时间,60分钟孵育时间适用于多数蛋白样本。
Tips 2:蛋白相互作用实验通常实验在室温下进行。如果有特定温度要求,则可以在更高或更低的温度下孵育。此外,在某些情况下,如果没有看到信号或低信号,提高或降低孵育温度将增强信号,而不会增加背景。加检测试剂
每孔加入5μL抗标签供体和5μL抗标签受体(可将检测试剂预混在一起,后以10μL/孔加入样本中)。盖上封板膜,室温静置,孵育60分钟。
Tips 1:在第一次实验时,可选择在1h、2h、3h、4h和18h进行多次检测,以获得最佳测检测信号。读板
去掉封板膜,平行放入酶标仪,选择TR-FRET程序进行读值。