实验步骤
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- 2
贴壁细胞处理
1.将50 μL细胞(按预先优化的密度)滴入96孔组织培养板中,加入合适的培养基。
2.37°C, 5% CO2孵育过夜。
3.若研究药物为激动剂:
a.加入50 μL刺激剂(2X),在无血清培养基中稀释。
b.在室温(RT)或37°C下孵育预优化时间。需要确定最佳孵育温度。
4.若研究药物为抑制剂:
a.加入25 μL抑制剂(4X),在无血清培养基中稀释。
b.在RT或37°C下孵育预优化时间。
c.加入25 μL刺激剂(4X),在无血清培养基中稀释。
d.在RT或37°C下孵育预优化时间。悬浮细胞处理
1.将20 μL细胞(按预先优化的密度)滴入96孔组织培养板中,加入合适的培养基。
2.直接进行细胞处理或在37°C 5% CO2中孵育2-4小时。此步骤可能需要优化。
3.若研究药物为激动剂:
a.加入20 μL刺激剂(2X),在无血清培养基中稀释。
b.在室温(RT)或37°C下孵育预优化时间。需要确定最佳孵育温度。
4.若研究药物为抑制剂:
a.加入10 μL抑制剂(4X),在无血清培养基中稀释。
b.在RT或37°C下孵育预优化时间。
c.加入10 μL刺激剂(4X),在无血清培养基中稀释。
d.在RT或37°C下孵育预优化时间