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阳离子聚合物法以阳离子聚合物PEI(Polyethylenimine)为载体,进行细胞转染的技术。PEI带正电,可以包裹带负电的核酸,形成核酸-聚合物的复合物,在静电作用下贴附在细胞膜上,通过内吞作用进入细胞。
以下以jetPRIME进行siRNA转染为例进行介绍:
实验步骤
- 1
- 2
- 3
细胞接种
为了达到比较好的siRNA转染状态,推荐使用50%汇合度的细胞。例如,使用6孔板进行实验,100000到150000细胞在转染前24h接种到培养孔中。如果是其他的规格,参考以下表格:
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混合siRNA和转染试剂
为了达到更好的转染状态,建议使用10-50nM siRNA。
以下的步骤以6孔板为例,其他规格参考以下表格。
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稀释22-110 pmoles siRNA(每孔终浓度为10-50nM)到200μl jetPRIME缓冲液中。颠倒混匀。震荡jetPRIME试剂5秒,短暂离心。加4μl jetPRIME试剂,涡旋1s,瞬离。室温孵育10-15min。
将混合物加入细胞进行培养
把转染混合物逐滴加到培养基中。轻柔摇晃培养皿,37℃培养。转染后4-24h置换到正常培养基中。