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3.3 阳离子聚合物转染(转染siRNA)

| 3.4 阳离子聚合物转染(Crisper-Cas9)

视频素材来源于Abnova  https://www.youtube.com/watch?v=RMUKdMAXXOY
版权归Abnova所有

 

阳离子聚合物法以阳离子聚合物PEI(Polyethylenimine)为载体,进行细胞转染的技术。PEI带正电,可以包裹带负电的核酸,形成核酸-聚合物的复合物,在静电作用下贴附在细胞膜上,通过内吞作用进入细胞。

 

以下以jetPRIME进行siRNA转染为例进行介绍:

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 1

    细胞接种

    为了达到比较好的siRNA转染状态,推荐使用50%汇合度的细胞。例如,使用6孔板进行实验,100000到150000细胞在转染前24h接种到培养孔中。如果是其他的规格,参考以下表格:

     

    △点击放大图片

  • 2

    混合siRNA和转染试剂

    为了达到更好的转染状态,建议使用10-50nM siRNA

    以下的步骤以6孔板为例,其他规格参考以下表格。

     

    △点击放大图片

    稀释22-110 pmoles siRNA(每孔终浓度为10-50nM)到200μl jetPRIME缓冲液中。颠倒混匀。震荡jetPRIME试剂5秒,短暂离心。加4μl jetPRIME试剂,涡旋1s,瞬离。室温孵育10-15min

  • 3

    将混合物加入细胞进行培养

    把转染混合物逐滴加到培养基中。轻柔摇晃培养皿,37℃培养转染后4-24h置换到正常培养基中。

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