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电转指电穿孔法转染,电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将外源分子导入细胞内,导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关。
Lonza公司的专利技术Nucleofector是一种创新的电转技术,利用电击在细胞膜上开孔,综合特定细胞转染程序与转染液的作用,核酸不仅可以进入细胞质,还可以直接通过核膜进入细胞核,可高效转染原代细胞,干细胞,神经元细胞系等。
实验步骤
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收获目的细胞
贴壁细胞用胰酶消化收获细胞。按照转染需要的细胞量进行计数,如20µL电转体系可转1x104-1x10
个细胞,100µL电转体系可转1x105-1x107个细胞。
加入质粒DNA并混匀
低速离心,尽量吸去细胞上清,用电转Buffer重悬细胞,加入转染杯,加入准备好的质粒DNA,轻轻混匀,避免产生气泡;
启动电转程序
将转染杯放入转染仪,按键选择相应程序,按"start"键开始转染,等待指示图标显示绿色"+"号,即可完成实验;
细胞培养
吸去电转Buffer,加入预热好的培养基,将细胞转移至培养皿中继续培养。若转染的质粒为试剂盒内的阳性对照质粒,一般在实验结束后7-8h内可在荧光显微镜下观察到实验结果。
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