视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=6SON7VAA5-k & https://www.youtube.com/watch?v=_3A1XPsFKJ4
版权归原作者所有
细胞迁移和侵袭是生物学研究中常见的现象，是细胞运动的重要形式，在机体的正常生长发育和生理过程中发挥重要作用，也与多种疾病的发生和发展密切相关。实验时在Transwell小室内铺上一层基质胶以模仿体内细胞外基质(ECM)，细胞想要进入下室就需要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解，计数进入下室的细胞可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
-
试剂温育
所有细胞培养试剂和细胞培养池放在37℃温育；
-
收集细胞
待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤1次，用无血清培养基重悬细胞，计数，调整浓度为2×105/mL；
-
铺基质胶
如进行侵袭实验，将基质胶从-20℃取出于4℃冰箱过夜，在4℃条件下将基质胶用无血清的细胞培养基稀释至300μL/mL，取100μL均匀涂抹一层于细胞培养池的PET膜上表面，然后将培养池轻轻放入24孔板孔内，37℃放置3h左右，取出于超净工作台过夜干燥。
注：如进行迁移实验，则跳过这一步骤
-
细胞培养
在下室(即24孔板底部)加入600－800μL 含10％血清的培养基，上室加入100－150μL细胞悬液，继续在孵箱培养24h；
-
检测
将Transwell下表面浸泡在70%甲醇溶液中，固定30min~60min，用结晶紫或台盼蓝染色，镜检，并计算细胞数。