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细胞冻存是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,这样可以最大限度的保存细胞活力。
细胞复苏的内容请参考前文1.3内容,以下主要对细胞冻存的内容进行介绍:
细胞冻存介绍
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细胞冻存的目的
适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。
细胞冻存的原则
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,这样可以最大限度的保存细胞活力。细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
细胞冻存分类
细胞冻存的方法主要涉及到细胞冻存液,其中所含有的DMSO为一种常用的低温保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。需注意的是,DMSO溶于培养基时,将释放大量热量,所以冻存液需提前配制,不能直接将DMSO加入含有细胞的培养基中,避免烫伤细胞。
目前细胞冻存液主要有两种:传统细胞冻存液与无血清冻存液。冻存液成分一般由基础培养液、胎牛血清、DMSO组成,基础培养液的比例为0%—70%,血清比例为20%~90%,DMSO比例为5%~10%。无血清冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
使用冻存盒或者冻存仪是最常用的冻存方法,市面上的冻存盒有些需要添加异丙醇,有些则不需要。冻存盒须恢复室温后再使用。