1.4.2 使用细胞分离液从血液中分离单个核细胞

Ficoll细胞分离液(Cytiva);

无菌 PBS(推荐爱必信，货号:abs962);

离心机;

15mL无菌离心管;

无菌注射器；

新鲜血液和Ficoll在使用和处理前应先放置室温至18℃-20℃。(血液建议现取现用)

取一个15mL离心管，加入2mL 血液和2mL PBS，吹打混匀。

Ficoll使用前应上下颠倒混匀，取一个新的15mL离心管，加入3mL Ficoll(用注射器吸取)。(人外周血和脐带血推荐 Ficoll 1.077，货号: 17144002；大鼠，小鼠外周血和脐带血推荐 Ficoll 1.084，货号:17544602)。轻缓的在 Ficoll 层上面加上4mL稀释后的血液。(注意千万不要混合血液层和Ficoll层)

离心400xg(注意不是rpm)，30-40min，18℃-20℃。(注意离心机需要缓升缓降，应关闭骤停制动设置)。

去除上层的血浆层，吸取中间的白膜层(淋巴细胞)至新的离心管中。

在吸取的淋巴细胞中加入3倍体积的PBS，重悬细胞，离心400-500xg，10-15min，18℃-20℃。重复洗一次，取淋巴细胞待用。