1.4.6 组织处理器分离实体组织细胞(肺脏组织)

在gentleMACS C管中，加入2.4mL 1X的解离缓冲液，100µL溶液I和15µL溶液II;

解剖取出小鼠肺脏，在培养皿中用PBS冲洗肺叶，去除残留的血液， 注意：确保从肺组织中去除了胸腺，心脏，输入和输出血管，器官和结缔组织；

把小鼠肺叶转移到含有酶混合液中的gentleMACS C管中;

拧紧C管，盖子向下插入gentleMACSTM Dissociator的卡槽中，注意：拧紧C管盖子时，拧过第一个阻力后，才能拧紧;

在开始 gentleMACSTM Dissociator的程序之前，必须确保样品材料在转子与管壁之间的酶混合液中;

打开gentleMACSTM Dissociator，选择m_lung_01程序;运行m_lung_01程序;

程序结束后，从卡槽取下C管，注意：在此步骤中，肺叶不会被完全解离，假如出现肺叶一点都没有解离的意外情况，重复第4 步;

使用MACS mixTube Rotator将样品在37℃孵育30分钟;

或者每5分钟进行转动重悬沉淀的组织碎片，转速设定为大约12rpm;

盖子向下插入gentleMACSTM Dissociator的卡槽中，必须确保样品材料在转子与管壁之间的酶混合液中;

选择并运行m_lung_02程序;

程序结束后，从卡槽取下C管;

快速离心收集样品;

重悬样品，在15mL离心管上放置一个70µM的预分离滤器，过滤细胞悬液，注意：解离好的样品可以通过C管中央的密封隔板取出，使用1000µL的ART^@1000 REACHTM移液器头;

用2.5mL的1XDissociation缓冲液清洗滤器;

丢弃滤器，300g 10分钟离心细胞悬液;

彻底去除上清，用5mLPEB缓冲液重悬细胞;

(可选)细胞计数;

300g离心10分钟，彻底去除上清，在合适的缓冲液中重悬细胞;

细胞应立即处理进行下游应用。