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美天旎的gentleMACS全自动组织温和处理器可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织(如脾脏、肝脏、肺部、肿瘤、表皮、神经组织等)中分离单个细胞悬液,也可将组织块制备成匀浆(如蛋白提取、核酸提取)。
实验步骤
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配置酶溶液
在GentleMACS C管中加入2.35mL RPMI 1640或者DMEM,100μL Enzyme D,50μL Enzyme R和12.5μL Enzyme A;
肿瘤预处理
从肿瘤样本中去除脂肪、纤维和坏死区域;
把肿瘤切成2-4mm小块并放置于C管中;
放入C管,设定程序
拧紧C管并上下颠倒放入组织处理器中。选择程序:m_impTumor_02,程序结束后取下C管,在37℃下孵育样品40分钟。把C管重新放入组织处理器,运行以下程序:1xm_impTumor_03(柔软组织)或者2xm_impTumor_03(坚硬组织)。
细胞过滤
取下C管,重悬样品并用MACS SmartStrainer(30um or 70um)细胞滤网过滤。用10mL RPMI1640或者DMEM培养基冲洗滤网。离心300xg,7min,吸取上清液;
如果组织处理器带有加热功能
直接运行37C_m_TDK_1(柔软组织)或者37C_m_TDK_2(坚硬组织),然后用细胞筛网进行过滤。