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1.4.7 组织处理器分离实体组织细胞(小鼠肿瘤组织)

| 1.4.8 磁珠分选

视频素材来源于Miltenyi Biotec   https://www.miltenyibiotec.com/CN-en/resources/video-library.html?currentChannelId=44187&currentVideoId=3vQ5NoGPqEAhWaS7-cu5pL
版权归Miltenyi Biotec所有

 

美天旎的gentleMACS全自动组织温和处理器可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织(如脾脏、肝脏、肺部、肿瘤、表皮、神经组织等)中分离单个细胞悬液,也可将组织块制备成匀浆(如蛋白提取、核酸提取)。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 1

    配置酶溶液

    在GentleMACS C管中加入2.35mL RPMI 1640或者DMEM,100μL Enzyme D,50μL Enzyme R和12.5μL Enzyme A;

  • 2

    肿瘤预处理

    从肿瘤样本中去除脂肪、纤维和坏死区域

    把肿瘤切成2-4mm小块并放置于C管中;

  • 3

    放入C管,设定程序

    拧紧C管并上下颠倒放入组织处理器中。选择程序:m_impTumor_02,程序结束后取下C管,在37℃下孵育样品40分钟。把C管重新放入组织处理器,运行以下程序:1xm_impTumor_03(柔软组织)或者2xm_impTumor_03(坚硬组织)。

  • 4

    细胞过滤

    取下C管,重悬样品并用MACS SmartStrainer(30um or 70um)细胞滤网过滤。用10mL RPMI1640或者DMEM培养基冲洗滤网。离心300xg,7min,吸取上清液;

  • 5

    如果组织处理器带有加热功能

    直接运行37C_m_TDK_1(柔软组织)或者37C_m_TDK_2(坚硬组织),然后用细胞筛网进行过滤。

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