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磁珠分选技术使用磁珠偶联的抗体去标记细胞,然后把标记好的细胞悬液置于磁场中,带磁珠的细胞会被吸附,没有连接磁珠的细胞被洗脱,从而实现分选。美天旎MACS技术是细胞磁珠分选的金标准,磁珠直径约50nm,对细胞无毒且生物可降解,适用于细胞的少量分选和大规模分选。
以下以CD3磁珠分离T细胞为例进行介绍
实验步骤
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- 2
- 3
- 4
样品准备
使用细胞分离液Ficoll分离出外周血单个核细胞,步骤参考1.4.2。
重悬细胞
确定细胞数目。细胞悬液离心300xg 10分钟。完全吸出上清。重悬细胞沉淀,每107个细胞中加入80μL缓冲液。
添加磁珠和检测抗体
每107个细胞中添加20μL CD3磁珠。充分混合并在4-8℃孵育15min。添加检测抗体,例如10μL CD3-FITC,4-8℃孵育5min。用1-2mL缓冲液清洗细胞,300xg离心10min,完全吸除上清。用500μL缓冲液重悬细胞。
磁珠分选
在MACS分选架上放置分选柱,用缓冲液润洗柱子;
把所有细胞悬液加入柱子中,收集流穿的未标记细胞,用缓冲液清洗柱子3次;
从分选器上移除柱子,加入缓冲液清洗,立即用柱塞将磁珠标记的细胞推出并收集。
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