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细胞培养是指在适宜的人工环境中(比如适宜的温度、pH,以及一定的营养等),使细胞生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种技术。细胞培养流程主要分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存。根据细胞种类的不同细胞培养分为原代培养和传代培养,根据其生长特点的不同又可分为贴壁培养和悬浮培养。
前期准备
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环境准备
由于细胞很容易受到污染,因此在做细胞培养实验之前需要先对环境进行灭菌。首先,在实验开始前,需要对细胞房和超净台进行紫外灯照射30分钟灭菌,实验操作前用75%酒精擦拭无菌操作台面和台面上的物品,并开启细胞房和超净工作台风扇进行通风。其次,在进入细胞房前,需要换上细胞房专用拖鞋、戴头套、手套和口罩,并穿好实验服。
仪器及实验用品准备
细胞培养主要用到的仪器和耗材包括:移液枪、枪头、酒精灯、打火机、镊子、记号笔、废液缸、封口膜、剪刀、离心机、细胞培养箱、培养瓶、培养板、酒精棉球、酒精喷壶、水浴锅等,在实验前应准备就绪。在放入超净台前应用酒精棉球擦拭或用酒精喷壶进行消毒。实验过程中需要用到的枪头,细胞培养瓶以及细胞培养板等要先经过无菌处理,并检查酒精灯中酒精是否足够以及废液缸中是否有废液。如果需要进行细胞复苏,应在实验前检查水浴锅的水量并提前打开备用。
试剂准备
实验中用到的试剂如DDW,培养基,血清,PBS,双抗等都需要提前进行无菌处理。血清一般保存于-20℃,应提前放置在4℃冰箱解冻;培养基应先放在37℃水浴中复温。