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Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料,可在嵌入细胞核双链DNA后释放蓝色荧光,是荧光染色的一种类型,可用来辨识内含DNA的细胞核的位置。
实验步骤
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- 2
- 3
细胞爬片放置
取普通洁净的细胞爬片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内用细胞培养级PBS或0.9%NaCl洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,加入细胞培养过夜;
固定及洗涤
待细胞长到80%左右,吸尽培养液,加入4%多聚甲醛固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜);
去固定液,用PBS洗两遍,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次;
染色与观察
加入终浓度为10μg/mL的Hoechst染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次;用PBS洗三遍;
将贴有细胞的爬片置于载玻片上;荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。