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Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料,可在嵌入细胞核双链DNA后释放蓝色荧光,是荧光染色的一种类型,可用来辨识内含DNA的细胞核的位置。
实验步骤
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- 2
- 3
固定及洗涤
离心收集细胞样品于1.5mL离心管内,加入0.5mL4%多聚甲醛固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜);
离心去固定液,用PBS洗三遍,每次3分钟;
染色
最后一次离心后吸去大部分液体保留约50mL液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀;晾干后,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动;
均匀滴上0.5mL Hoechst 染色液,染色5分钟,用吸水纸从边缘吸去液体,晾干;用PBS洗三遍,每次3分钟;
封片观察
滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡;荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。