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细胞计数是检测细胞活性的基础方法之一,利用计数板或计数仪得出细胞数目,操作简单,可用于绘制细胞生长曲线,但是却无法区分增殖细胞和非增殖细胞,且手工计数耗时较久,因此并不适合样品量多的情况。
实验步骤
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放置计数板
用 96%酒精冲洗计数板后,用洁净纸擦干;把盖片覆在计数板上面,使之微微移向一侧,露出计数板台面少许,以便滴加细胞悬液;
台盼蓝染液染色
取吸管1支,伸入培养瓶中,轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后,立即吸细胞悬液少许,向另一离心管中滴入细胞悬液9滴,再滴入台盼蓝染液1滴,混匀,置 2~3分钟;
滴加细胞悬液
把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴 1~2滴已染色的细胞悬液,使之充满计数板和盖片间空隙中;
显微镜观察
显微镜下观察可见细胞分散各处,健康细胞胞体完整,透明不着色,凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数;压中线者只计算左线和上线者,右线和下线不计算在内(即仅计算压两个边的细胞)。