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4.4.5 LDH法检测细胞活性

| 4.4.6 Calcein AM检测细胞活性

视频素材来源于abnova  https://www.youtube.com/watch?v=9EM_JcdtJIY
版权归原作者所有

 

LDH法,是通过检测受损细胞膜释放的LDH量,来确定死亡细胞数。乳酸脱氢酶(LDH),是一种稳定存在于细胞胞浆中的酶,在正常状态下,仅存在于细胞内。当细胞受到刺激死亡时,质膜发生破裂,LDH被迅速释放至细胞外(在实验中被释放到细胞培养液中),因此被作为细胞毒性研究中,使用最广泛的标记物之一。LDH法与CCK-8法都具有染料水溶性好、细胞毒性弱、操作简单、检测时间短等优点,适合快速、高通量检测,使用的染料也基本相似。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 1

    细胞铺板

    将细胞的密度调整为1×105个/mL,取100μL加入96孔培养板中,向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质(药物、化学试剂等待检测物质),定容至200μL

    细胞自然释放孔加细胞和培养液各100μL,细胞最大释放孔加细胞和2.5% TritonX-100100μL,放入培养箱中4h

  • 2

    加入LDH基质液和HCL

    然后将96孔培养板以250g离心5min,每孔吸取上清100μL置于平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μL,反应5min,每孔加入30μL HCl(1mol/L),在酶标仪490nm处测定吸光度值;

  • 3

    计算细胞毒性

    按下式计算细胞毒性:细胞毒性(%)=[反应孔OD(490nm)-自然释放孔OD(490nm)/最大释放孔OD(490nm)-自然释放孔OD(490nm)]×100%

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