视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=xjLt--ihf2Q
版权归原作者所有
荧光染料CFSE，也称CFDA SE(5，6-carboxyflu- orescein diacetate，succinimidyl ester)即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料。CFDA SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。CFDA SE标记的细胞也可以用荧光显微镜进行观察，但由于每增殖一次细胞荧光减弱一半，在镜下较难区分荧光减弱一半的细胞，因此更加推荐采用流式细胞仪进行分析。具体操作步骤如下：
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
-
配制溶液
根据试剂盒说明配制CFDA SE储存液和细胞标记液；
-
收集细胞并标记
细胞正常培养及药物等处理后，收集细胞至15mL 离心管，用1mL CFDA SE细胞标记液重悬细胞；
-
加入CFDA SE 储存液
加入相应比例的CFDA SE 储存液，轻轻混匀；37度孵育10分钟；
-
清洗
立即加入约10mL 细胞培养基，室温下轻轻颠倒混匀；离心，去除上清液，加入5mL 细胞培养基洗涤一次；离心后去上清，加入5mL 细胞培养基，37度孵育5分钟；再次离心，去上清；
-
荧光显微镜观察
加入细胞培养基重悬细胞，进行正常细胞的培养或处理等操作，后续可在荧光显微镜下直接观察细胞标记数目以反应细胞增殖情况，或用流式细胞仪检测细胞增殖情况。