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EdU中文名为5-乙炔基-2'-脱氧尿苷，是一种新型胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，可在DNA复制过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。EdU的乙炔基可与荧光或生物素标记的叠氮化物发生共价反应，形成稳定的三唑环，从而通过荧光检测到细胞增殖在，并且EDU试剂盒在检测细胞增殖应用很广泛(内含 EdU、荧光探针或生物素探针、反应液、Hoechst等试剂)。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
实验步骤
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检测体系准备
(1)可检测96孔板、48孔板、12孔板、6孔板等不同细胞培养板的细胞，检测体系根据需要按比例调整；
(2)可检测贴壁细胞和悬浮细胞。悬浮细胞则需要增加离心步骤，其他反应步骤同贴壁细胞；
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接种细胞(贴壁细胞为例）
取对数生长期的细胞消化后，用完全培养基重悬细胞至密度为2×105个/mL，准备96孔板，每孔接种100μL细胞悬液(每孔接种量为1×104个细胞)，放置37℃恒温细胞培养箱培养过夜待细胞贴壁；
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根据实验需要对细胞进行药物处理或其他刺激处理等；
根据实验需要对细胞进行药物处理或其他刺激处理等；
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EdU 标记
(1)用完全培基稀释EdU至20µM，96孔板中每孔加入100µL稀释好的EdU工作液，使其终浓度为10µM(对于大部分细胞来说适合的浓度)，37℃继续孵育2小时，细胞孵育时间的长短取决于细胞生长速度，对于常见的细胞类型，一般孵育2小时即可；
(2)去除细胞培养基，用PBS洗涤1~2次，每次3分钟；
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固定细胞
(1)细胞固定:去除洗涤液，每孔加入50μL 4%多聚甲醛室温固定细胞30min；
(2)去除固定液，用PBS洗涤3次，每次3~5分钟；
(3)去除PBS，每孔加入100µL通透液(0.5%TritonX-100的PBS)在室温下孵育10~15分钟；
(4)去除通透液，用PBS洗涤1~2次，每次3~5分钟；
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染色（避光）
(1)按照试剂盒说明配置反应液，对于96孔板，每孔加入50µL反应液，轻轻摇晃培养板以确保反应液均匀覆盖样本，在室温下避光孵育30分钟；
(2)去除反应液，PBS洗涤3次，每次3~5分钟；
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细胞核染色（避光）
(1)去离子水稀释Hoechst33342反应液至1X，去除PBS洗涤液后，每孔加入100µL1X的Hoechst33342，室温避光染色10分钟；
(2)去除Hoechst，用PBS洗涤3次，每次3~5分钟；
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计数和拍照
在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察EdU标记和未标记的细胞，拍照并计数。实验需进行三次重复，实验中的每个组需设有至少三个复孔。最后采用统计软件进行数据的分析。
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流式细胞仪或荧光酶标仪检测
对于步骤6或者7获得的细胞悬液样品，可进行流式检测或酶标仪检测。对于流式仪，检测过程中使用低流速，使用未经EdU标记的细胞作为阴性对照。流式仪和荧光酶标仪检测中的激发波长和发射波长根据试剂盒中的荧光探针确定。