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细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变。其中磷脂酰丝氨酸外翻,Annexin-V在钙离子存在的条件下与其高亲和力特异性结合。Annexin-V染色阳性,则表示细胞处于早期凋亡状态。Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检查细胞凋亡的发生,Annexin-V用FITC标记发绿色荧光,如果用PE标记就发红色荧光。具体操作步骤如下:
实验步骤
- 1
- 2
- 3
收集细胞
离心收集悬浮细胞,微量离心机转速2000RPM,离心时间5min,弃培养基;用冷PBS洗涤细胞两次;用400μL 1X Binding Buffer悬浮细胞,浓度大约为1X 10cells/mL;
加入Annexin V-FITC和PI
在细胞悬浮液中加入5μL Annexin V-FITC,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟;加入10uL PI后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育5分钟;
检测
在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。