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4.6.3 JC-1检测细胞凋亡

| 4.6.4 半胱天冬酶活性检测试剂盒(Caspase)检测细胞凋亡

视频素材来源于YouTube  https://www.youtube.com/watch?v=lN_ejGhQyAs
版权归原作者所有

 

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位,线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。正常生理状态下,线粒体负电性高,JC-1进入线粒体以多聚体存在,红色荧光强,细胞凋亡时,线粒体去极化产生,负电性降低,JC-1则以单体存在细胞质,绿色荧光增强。具体操作步骤如下:

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 1

    配制JC-1工作液

    JC-1染色工作液的配制,按照试剂盒说明配制相应用量的JC-1染色工作液

  • 2

    设置阳性对照

    设置阳性对照,阳性对照为CCCP, 按照10μM的终浓度37℃处理细胞20分钟;

  • 3

    收集细胞

    若用流式仪检测,则收集细胞,悬浮细胞直接收集,贴壁细胞消化后收集,细胞1000rpm离心后3分钟,去上清液,用0.5mL细胞培养液重悬;

  • 4

    加入JC-1染液

    加入0.5mL JC-1染色工作液,混匀后置CO2培养箱继续孵育20分钟;

    600g4℃离心3分钟,用移液器小心移去上清。用JC-1染色缓冲液洗2次,以600g4℃离心,每次3分钟;弃上清,每管加500μL JC-1染色缓冲液重悬细胞;

  • 5

    检测

    流式细胞仪检测细胞,每个样品检测,10000个细胞,获取检测数据并分析;

  • 6

    如果用荧光显微镜检测

    若用荧光显微镜拍照检测,则不用收集细胞,需检测的细胞去除培养基,PBS洗涤1次;加入1mL JC-1染色液,细胞培养箱中孵育20分钟;去除上清,用JC-1染色缓冲液洗涤2次;加入1mL细胞培养基,荧光显微镜下观察拍照

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