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半胱天冬酶(Caspase)活化是细胞凋亡早期的重要信号。半胱天冬酶属于半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶家族，是细胞凋亡相关的复杂细胞过程的关键调节因子。绝大多数情况下，所有的凋亡信号都会汇集到凋亡的最终执行者Caspase-3上。在正常细胞中，Caspase-3以酶原形式存在，在凋亡早期Caspase-3被激活，并执行最后的凋亡程序。因此可以通过检测Caspase 3剪切体的含量或Caspase 3的活性来反应细胞凋亡过程。此外，也可以通过检测Caspase-3的底物——PARP蛋白的含量来检测细胞凋亡。具体操作步骤如下：
实验步骤
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样品制备
以适当方法诱导(如2x106个细胞)凋亡(1-24小时)。诱导后，以冷PBS洗涤细胞并离心(300xg)5分钟，收集细胞。设置未经诱导的阴性对照；
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重悬细胞
加入细胞裂解液，冰上孵育1分钟。 待细胞裂解后可以于-20°C储存一周；或直接离心，室温1分钟，取细胞溶解液100μL用于测定；
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包板
用抗Caspase 3抗体包被液包被微孔板，孵育37℃1小时或4℃过夜。 用封闭缓冲液于室温条件下作用30min，以封闭非特异性结合。弃去封闭缓冲液，并用孵育缓冲液洗三次；
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测定Caspase 3活性
将样本(细胞裂解液100μL、阴性对照、阳性对照)加至抗caspase 3包被MTP的微孔中，37℃孵育1小时， 弃去未结合标本， 以孵育缓冲液于室温洗板3次，每次1min。 加入新鲜配制的Caspase底物溶液， 37℃ 反应1~3小时； 然后进行荧光光度检测， 激发波长400nm， 发射波长为505nm。