视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=YGoR9u5Ej0E
版权归原作者所有
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧尿苷三磷酸核苷酸(dUTP)和荧光素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，称为TUNEL法。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL是检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
-
贴壁细胞，悬浮细胞和冰冻切片的染色(此处以六孔板为例)：
PBS清洗孔中细胞或者收集到的悬浮细胞；4%多聚甲醛固定细胞30分钟；0.3% Triton X-100的PBS重悬细胞，室温孵育5分钟；
-
加入TUNEL检测液
配制TUNEL检测液(TDT酶:荧光标记液:TUNEL检测液=1:9:10)，在孔中加入100μL混匀的TUNEL检测液，37℃避光孵育1h(孵育时需注意在多余的孔中加入适量的水一保持湿润，从而尽量减少TUNEL检测液的蒸发)；PBS洗涤三次，每次5分钟；
-
显微镜观察
荧光显微镜下观察拍照