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美天旎的gentleMACS全自动组织温和处理器可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织(如脾脏、肝脏、肺部、肿瘤、表皮、神经组织等)中分离单个细胞悬液,也可将组织块制备成匀浆(如蛋白提取、核酸提取)。
实验步骤
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放入小鼠脾脏
将小鼠脾脏加入含有PEB缓冲液的gentleMACS C管中:
1-2个小鼠脾脏加3mL;
3-4个小鼠脾脏加6mL;
5-6个小鼠脾脏加9mL;
放入C管
拧紧C管管盖,将其倒置于gentleMACS Dissociator上,注意:拧紧C管超过第一道阻力点;确保样品材料位于转子/定子区域;
选择程序
选择并运转以下程序之一:1–2 mouse spleens: m_spleen_01、3–6 mouse spleens: m_spleen_04;
取出C管,离心
程序终止后,将C管从gentleMACS Dissociator中取出;
(可选)瞬时离心,收集管底样本;
过滤
重悬样本,将细胞悬液通过MACS SmartStrainer(70μM)过滤至15mL离心管中(1-2个小鼠脾脏/C管)或50mL离心管中(3-6个小鼠脾脏/C管),注意:MACS SmartStrainer使用之前先用2mL缓冲液过滤一次;
C管管盖中心有隔膜密封的小口,可通过这个小口将解离的组织从C管中移取出来(使用1000μL的移液枪);
离心弃上清
用5mL缓冲液清洗滤器;
弃滤器,细胞悬液300g室温离心10min,完全弃去上清;
重悬细胞
用PEB缓冲液重悬细胞至合适体积用于后续的流式细胞染色。