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1.4.5 组织处理器分离实体组织细胞(脾脏组织)

| 1.4.6 组织处理器分离实体组织细胞(肺脏组织)

视频素材来源于Miltenyi Biotec   https://www.miltenyibiotec.com/CN-en/resources/video-library.html?currentChannelId=44187
版权归Miltenyi Biotec所有

 

美天旎的gentleMACS全自动组织温和处理器可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织(如脾脏、肝脏、肺部、肿瘤、表皮、神经组织等)中分离单个细胞悬液,也可将组织块制备成匀浆(如蛋白提取、核酸提取)。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 1

    放入小鼠脾脏

    将小鼠脾脏加入含有PEB缓冲液的gentleMACS C管中:

    1-2个小鼠脾脏加3mL;

    3-4个小鼠脾脏加6mL;

    5-6个小鼠脾脏加9mL;

  • 2

    放入C管

    拧紧C管管盖,将其倒置于gentleMACS Dissociator上,注意:拧紧C管超过第一道阻力点;确保样品材料位于转子/定子区域;

  • 3

    选择程序

    选择并运转以下程序之一:1–2 mouse spleens: m_spleen_01、3–6 mouse spleens: m_spleen_04;

  • 4

    取出C管,离心

    程序终止后,将C管从gentleMACS Dissociator中取出;

    (可选)瞬时离心,收集管底样本;

  • 5

    过滤

    重悬样本,将细胞悬液通过MACS SmartStrainer(70μM)过滤至15mL离心管中(1-2个小鼠脾脏/C管)或50mL离心管中(3-6个小鼠脾脏/C管),注意:MACS SmartStrainer使用之前先用2mL缓冲液过滤一次;

    C管管盖中心有隔膜密封的小口,可通过这个小口将解离的组织从C管中移取出来(使用1000μL的移液枪);

  • 6

    离心弃上清

    用5mL缓冲液清洗滤器;

    弃滤器,细胞悬液300g室温离心10min,完全弃去上清;

  • 7

    重悬细胞

    用PEB缓冲液重悬细胞至合适体积用于后续的流式细胞染色。

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