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2.2 DNA转染步骤

| 3.1 疑难解答

(以下所有步骤均以转染试剂jetPRIME进行DNA转染为例

下述转染步骤中为6孔板单孔参考条件。对于其他培养形式,请参考表二:

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 1

    DNA稀释到缓冲液中

    将2µg DNA稀释到200µL jetPRIME®缓冲液(提供)中。通过涡旋混合。

  • 2

    涡旋震荡

    涡旋震荡jetPRIME®5秒,使用前短暂离心。

  • 3

    添加 jetPRIME转染试剂

    添加4µL jetPRIME®,涡旋1秒钟,短暂离心。

  • 4

    孵育

    在室温下孵育10分钟

  • 5

    均匀分布转染混合物

    将200µL转染混合物逐孔滴加到含血清培养基中的细胞上,并均匀分布。

  • 6

    摇晃并37℃孵育

    轻轻地来回摇晃培养板使,后置于在37°C孵育

  • 7

    实验提醒

    如果需要,在转染后4小时至24小时用细胞生长培养基替换转染培养基,并根据需要进行分析。

  • 8

    分析时间

    24小时后或之后分析。

     

    表 2. 根据每孔使用的细胞培养容器的DNA转染指南

    Culture vessel Volume of buffer (μL) Amount of DNA (μg) Volume of jetPRIME® reagent μL) Volume of growth medium (mL)
    96-well* 10 0.1 0.2-0.3 0.1
    24-weII 50 0.5 1-1.5 0.5
    12-well 75 0.8 1.6-2.4 1
    6-well/ 35 mm 200 2 4-6 2
    60 mm / flask 25 cm2 200 4 8-12 5
    100 mm / flask 75 cm2 500 10 20-30 10
    150 mm / flask 175 cm2 1000 20 40-60 20

    *制备至少50µL的主混合物,以便准确吸移和均匀制备复合物

  • 9

    标准条件

    1:2 DNA to jetPRIME® ratio (w/v)

    相当 1µg DNA 用 2µL jetPRIME®

    图示:转染示意图

    △点击放大图片


    注意:转染成功,jetPRIME® buffer必不可少

     

     

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