(以下所有步骤均以转染试剂jetPRIME进行DNA转染为例)
下述转染步骤中为6孔板单孔参考条件。对于其他培养形式,请参考表二:
实验步骤
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- 9
DNA稀释到缓冲液中
将2µg DNA稀释到200µL jetPRIME®缓冲液(提供)中。通过涡旋混合。
涡旋震荡
涡旋震荡jetPRIME®5秒,使用前短暂离心。
添加 jetPRIME转染试剂
添加4µL jetPRIME®,涡旋1秒钟,短暂离心。
孵育
在室温下孵育10分钟。
均匀分布转染混合物
将200µL转染混合物逐孔滴加到含血清培养基中的细胞上,并均匀分布。
摇晃并37℃孵育
轻轻地来回摇晃培养板使,后置于在37°C孵育。
实验提醒
如果需要,在转染后4小时至24小时用细胞生长培养基替换转染培养基,并根据需要进行分析。
分析时间
24小时后或之后分析。
表 2. 根据每孔使用的细胞培养容器的DNA转染指南
Culture vessel Volume of buffer (μL) Amount of DNA (μg) Volume of jetPRIME® reagent μL) Volume of growth medium (mL) 96-well* 10 0.1 0.2-0.3 0.1 24-weII 50 0.5 1-1.5 0.5 12-well 75 0.8 1.6-2.4 1 6-well/ 35 mm 200 2 4-6 2 60 mm / flask 25 cm2 200 4 8-12 5 100 mm / flask 75 cm2 500 10 20-30 10 150 mm / flask 175 cm2 1000 20 40-60 20 *制备至少50µL的主混合物,以便准确吸移和均匀制备复合物
标准条件
1:2 DNA to jetPRIME® ratio (w/v)
相当 1µg DNA 用 2µL jetPRIME®
图示:转染示意图
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注意:转染成功,jetPRIME® buffer必不可少