3.1 疑难解答

1. 优化jetPRIME^®试剂的体积和每孔质粒DNA的添加量。首先增加jetPRIME®试剂的体积；如果仍然不够，根据表3增加DNA的量

2. 确保在血清存在的情况下进行转染，因为jetPRIME^®在血清存在时具有更高的转染效率

3. 确保转染期间细胞不在OptiMEM^®中

4. 确保核酸在提供的jetPRIME^®缓冲液中稀释

5. 使用含有常见报告基因(如荧光素酶或GFP)的质粒作为阳性对照

6. 优选使用浓度为0.3至1µg/µL的DNA制剂

7. 对于已知难以转染的细胞，首先使用表2中建议的1.5倍DNA用量。如果观察到毒性，则减少DNA用量

8. 使用不含蛋白质和RNA的高质量质粒制剂(OD260/280>1.8)

9. 通过缓慢上下吹打代替涡旋，使转染混合物均匀化

1. 确保所有试剂不含RNA酶

2. 确保siRNA的质量达到最佳(浓度、退火和设计)

3. 如果进行共转染，则优化siRNA和DNA的用量

1. 在较早的时间点分析转染(例如，在24小时而不是48小时)

2. 转染后4小时清洗细胞

3. 减少每孔添加的质粒DNA用量

4. 确保核酸用提供的jetPRIME^®缓冲液中稀释

5. 减少jetPRIME^®试剂的体积

6. 确保质粒制剂不含内毒素

7. 验证表达蛋白的毒性。如果表达的蛋白质对细胞有毒，减少质粒DNA的用量

 

表3.不同细胞培养容器的优化指南

Culture vessel	Volume of buffer (μL)	Amount of DNA (μg)	Volume of jetPRIME® reagent (μL)
96-well*	10	0.05-0.2	0.1-0.6
24-well	50	0.25-0.75	0.5-2.25
12-well	75	0.4-1.2	0.8-3.6
6-well / 3.5 cm	200	1-3	2-9
60 mm / flask 25 cm2	200	2-6	4-18
100 mm / flask 75 cm2	500	5-15	10-45
150 mm / flask 175 cm2	1000	10-30	20-90