3.3 总蛋白染色

为蛋白质印迹提供了一种快速、简便的可逆染色方法，但对于检出限大于250ng的蛋白质的灵敏度较差。

丽春红可与硝化纤维素和PVDF膜相容。

丽春红染色是观察PAGE胶上蛋白转移到膜上的一种快速、简便的方法。

丽春红很容易用水洗脱，被认为是一种“温和”的处理方式，不会干扰随后的免疫检测。

注意，当使用PVDF膜结合SDS-PAGE时，确保膜在转印后先在100%甲醇中洗涤，再进行染色，因为丽春红染色液与SDS不相容。

考马斯亮蓝一般用于聚丙烯酰胺凝胶染色，同样适用于膜。

用0.1%考马斯染料在45%甲醇和10%乙酸的混合物中溶解，对膜进行染色。

然后使用25%甲醇和10%乙酸的混合物对背景进行脱色。

一种对印迹蛋白高度敏感的染色剂，检测限可低至1ng蛋白。

胶体金可用于硝化纤维素和PVDF膜。

胶体金的低pH值确保了颗粒选择性地与膜上的蛋白结合。

使用银增强试剂可进一步增强信号。

便宜且灵敏度较高的方法，且不干扰后续的抗体结合。

先在PBS-吐温(0.05%)中对膜进行封闭，再进行染色，可避免高背景。

或者在染色液中加入PBS-吐温(0.05%)及1%的乙酸。

专为膜上蛋白快速染色设计。

灵敏度接近于考染，但染色速度更快。

它是蛋白质测序和蛋白质原位切割的首选染色剂，用25%异丙醇和10%乙酸可快速脱色蛋白质。

染色液	优点	缺点	注意
胶体金	适用于NC及PVDF膜
考马斯亮蓝	便宜	在背景脱色过程中，蛋白会释放染料	可使用加热的染色液及脱色液缩短染色时间
	可重复使用	不同蛋白脱色速率不一致	可在脱色池放入组织吸附剂，有助于缩短脱色时间
		相对较窄的动态范围、耗时	使用50%三氯乙酸加入0.25%考马斯亮蓝，帮助提高检测灵敏度
丽春红	快速、易于保存	灵敏度低	可用水脱色、推荐用于染色而不是免疫检测
墨汁	快速、便宜	缺少对比、很难成相分析	不可逆但不影响后续免疫检测
酰胺黑	快速、易于保存	膜有变形可能	不可逆、不适宜后续免疫检测