常用的转膜方法有半干转和湿转两种方法。
半干转转膜时间较短，小分子量蛋白半干转效果较好，因为体系中缓冲液较少，故不适用于大分子量蛋白。
湿转的转膜时间相对较长，但是转膜完全，大分子量蛋白建议用湿转。
转完膜之后可以用合适的显色液对转膜效果进行检测，常用的显色液有丽春红、考马斯亮蓝、酰胺黑等。
实验室Tips
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
-
大分子量蛋白
1、 转膜缓冲液里加入0.1%的SDS
2、 甲醇浓度降到10%甚至更少
3、 用4°C湿转过夜代替半干法转膜
4、 大分子量蛋白转膜时间可适当延长至2-3h，电流可调至100mA左右 -
小分子量蛋白
1、 去净缓冲液里的SDS
2、 保持甲醇浓度在20%
3、 用小孔径的膜
4、 小分子量蛋白转膜时间可缩短至30min -
膜的方向确定
转移后剪角做标记，分清正反面;用铅笔做记号或电泳时Marker上成非对称的
-
转膜后背景高
选择NC膜
-
转膜时污染
避免手指触碰膜，可以用镊子来取膜，油脂和蛋白质会弄脏膜
-
滤纸的大小
确保滤纸和膜的大小与胶一致。当使用半干法转膜时，过多的部分会阻碍电流穿过膜