5.2.1 抗体孵育

封闭好的膜用15ml的TBST洗3次，每次5min;

如果需要按照不同靶蛋白将膜剪裁成几段，可以在洗完膜之后，将膜夹在透明干净的塑料膜中间，根据marker的指示从合适的地方剪裁开，整个实验过程中要注意保持膜的湿润，以防止干膜导致的高背景等，剪裁好的膜放到孵育盒不同的格子里，并做好记号; 

加入10ml稀释好的一抗4°C摇床过夜孵育;

用15ml的TBST洗3次，每次5min;

用10ml稀释好的二抗室温摇床孵育1h，如果采用荧光二抗的话，在孵育抗体以及后续的洗膜过程中，需要用锡箔纸将孵育盒包裹住，以避免荧光淬灭;

用15ml的TBST洗3次，每次5min;