7.4 P-AKT

在细胞许多生物学功能中，PI3K/Akt信号通路发挥重要的调控作用，在细胞内起抑制凋亡，促进增殖的作用。作为PI3K的下游蛋白，Akt主要有两个重要的磷酸化位点 Thr308和Ser473。
PI3K不能直接活化Akt它是通过与细胞内含有PH结构域的信号蛋白Akt和磷脂酰肌醇依赖激酶l(phosohoinositide-dependentkinase1，PDK1)结合，诱导Akt到细胞膜上，然后催化Akt蛋白的Thr308位点发生磷酸化，从而部分激活Akt，但是Akt功能活性的充分发挥还需要Ser473的磷酸化。

在许多细胞系(尤其是肿瘤细胞系)中，对Akt功能的抑制多是通过抑制PI3K的功能(如使用PI3K特异性抑制剂LY294002和 Wortmannin)而实现的，以p-Akt(Ser473)表达含量的降低为主要指标。 

在WB过程中，样本处理不当是磷酸化Akt条带出现问题的主要原因。
因此我们一定要注意合理的诱导方式。
刺激种类，强度(浓度)时间 都会影响磷酸化的水平。
Akt的磷酸化发生得很快，信号也消失得很快，一般建议对样本做短时间的处理，例如用Insulin、CalyculinA、 PDGF等处理10-30分钟，就可以得到很强的 Akt磷酸化结果。