实验步骤
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钙黏着蛋白
钙黏着蛋白(Cadherin)是在其胞外结构域中含有大约 100个残基的钙黏着蛋白重复序列的跨膜糖蛋白超家族。Cadherin介导钙依赖性细胞-细胞黏附,并在正常组织发育中发挥至关重要的作用。经典的Cadherin家族包括 N-、P-、R-、B- 和 E- Cadherin,以及约十个在黏附连接中存在的其他成员。E- Cadherin是许多上皮癌细胞浸润和生长的活性抑制蛋白。
EMT转化
研究表明,许多癌细胞存在E-Cadherin表达下降,N-Cadherin表达上调,即EMT转化。
E-Cadherin在绝大部分正常组织和细胞可以检测到的,在肿瘤细胞的表达有差异,确认可以表达的细胞系有MCF7、HCT116、T-47D 等。在WB过程中,我们可以选择这三种细胞系作为阳性对照,排查问题。
同时,我们也可以去检测EMT过程中其他蛋白(如下图所示) 的变化趋势,是否符合预期的趋势。
另外,E-Cadherin是一种膜蛋白,制样时进行超声,可以充分暴露蛋白的表位。
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