实验步骤
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p53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用
p53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用,p53参与调控的基因已超过160种。p53是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因,p53在许多类型的肿瘤中起着抑癌作用,取决于生理情况和细胞类型而诱导生长停滞或凋亡。另外,p53作为反式激活因子参与细胞周期调控。
在WB过程中,我们一定要注意样品本身的表达水平
在WB过程中,我们一定要注意样品本身的表达水平,例如Hela、293T和Jurkat等细胞是本底不表达p53或者极低水平表达,这类细胞 适合做转染实验。我们列举出了部分细胞系中p53的表达情况,如下表:
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如果碰到WB无条带的情况,一定要选择合适、可靠来源的细胞进行实验,样品注意新鲜制备。p53是一个核蛋白,裂解时强烈建议超声处理,或者用专门的核提取试剂盒。 另外,p53有多个磷酸化位点和乙酰化修饰,以及多种亚型,这也是在一些样本中容易出现多条带的原因,不同亚型是以组织依赖性的方式表达。