常用的转膜方法有半干转和湿转两种方法。
半干转转膜时间较短，小分子量蛋白半干转效果较好，因为体系中缓冲液较少，故不适用于大分子量蛋白。
湿转的转膜时间相对较长，但是转膜完全，大分子量蛋白建议用湿转。
转完膜之后可以用合适的显色液对转膜效果进行检测，常用的显色也有丽春红、考马斯亮蓝、酰胺黑等。
实验步骤
- 1
- 2
-
半干转
半干法转印比湿转快，且消耗较少的缓冲液。
膜与胶直接接触，并在凝胶和膜的上方和下方各放几层缓冲液润湿的滤纸。
三明治由滤纸、凝胶、膜、滤纸组成，放置在电场中。
半干转印通常比湿转效率低，特别是对于大分子量蛋白。
当电极板吸附热量时，产热对于半干 转印的影响较小，但应避免延长半干转印时间，因为这可能导致由于缓冲液耗尽而造成的过热和凝胶干燥。
滤纸和膜应剪成比凝胶的长和宽小几毫米。
确保滤纸和膜不与凝胶重叠，避免系统短路，或导致蛋白质的低效或不均匀转移。
△点击放大图片
半干转印系统
半干转是在恒流(0.8mA/cm2)的条件下进行的，时间比较快，大约15-45分钟。
注意: 进行电转时，确保在将凝胶涂敷到膜上时不形成气泡。
气泡会导致膜上没有蛋白质转移的空白点。
可使用预冷的转印缓冲液，可避免转印中系统过热。
如果无法确认组装三明治或连接电源是否正确，请预先在凝胶两侧放一张膜，避免丢失蛋白。
彩色marker将帮助您确定蛋白转移至哪张膜上!
小分子蛋白可穿透转印膜，因此可同时使用两张膜转印小分子蛋白。 -
湿转
湿转实验中，凝胶和膜都完全浸没在转印缓冲液中，并且电流的方向是由胶到膜。
通常，湿转需要冷却单元并通过磁力搅拌棒对转移缓冲液进行内部循环。
对于大分子量蛋白，建议采用湿转，但是转印速度较慢并需要大量的缓冲液。
为了得到清晰、尖锐的条带，获取高质量的转印效果，优先选择湿转，次选半干法转印。
在湿转过程中，大量缓冲液会升温，温度升高会导致蛋白质不可逆地变性。 因此，使用冷却缓冲液并保持低温非常重要，许多商品化湿传系统可连接到恒温循环水浴。
另一个常见的过程是在4°C环境下进行整个湿转实验，比如在冰箱中。
蛋白分子量和转膜条件:200~350mA 70min,恒压70~ 120V 90min。
槽(湿式)转印系统
△点击放大图片
注:以上转膜条件仅供参考,实际条件根据蛋白大小调整。