如果研究对象为外泌体，需要把外泌体提取出来进行单独研究，则准备好相应的试剂。接下来以QIAGEN的76064做一个成分和步骤的讲解。如果用的是其他品牌的试剂盒，可以参考其说明书进行操作。
| 组分 | 76064 |
| exoEasy Maxi Spin Columns (in 50 ml Collection Tube) | 20个 |
| Collection Tubes (50 ml) | 20个 |
| Buffer XBP | 3 x 55 ml |
| Buffer XWP | 1 x 200 ml |
| Buffer XE | 45ml |
实验步骤
- 1
- 2
-
使用前准备
(1) 76064试剂盒在室温下运输，可以将所有组分在室温(15‒25°C)下干燥存放，其中Buffer XE是无菌溶液，建议在无菌条件下处理;
(2) 本说明是用于外泌体或其它囊泡结构的分离，血清血浆样本的上样量为0.2-4ml，细胞培养上清的上样量为16ml。如果使用的细胞培养上清样本，该柱子的承载量取决于细胞的类型和细胞的培养条件。 -
外泌体提取蛋白操作步骤
(1) 将血浆或细胞培养上清液样品用过滤装置过滤后收集，以去除大于0.8μm的颗粒;
(2) 将缓冲液XBP和样品按1:1的比例混合，室温下轻柔颠倒混匀5次;
(3) 将样品和XBP缓冲液的混合物加入到柱子中，4°C 500g离心1min，丢弃收集管中的液体，将柱子重新放入收集管;
(4) 向柱子中加入10ml的XWP缓冲液，4°C 5000g离心5min，去除柱子中剩余的液体，丢弃收集管及其中的液体;
(5) 将柱子转移到新的收集管中，向柱子中的膜上加入400μl‒1ml缓冲液XE，孵育1min，4°C 500g离心5min，收集洗脱液;
(6) 将(5)中收集的洗脱液重复洗脱，向柱子中再次加入400μl‒1ml缓冲液XE，孵育1min，4°C 500g离心5min，洗脱液即含有外泌体。